RESUMO
O objetivo foi avaliar protocolos de maturação in vitro (MIV) para oócitos de cutias, seguida de fertilização in vitro (FIV) e ativação partenogenética (AP). Os oócitos imaturos (CCOs) foram obtidos por fatiamento do ovário, após OSH, e submetidos a três grupos: MAT - 16 (16 horas de maturação), MAT - 20 (20 horas de maturação) e MAT - 24 (24 horas de maturação), em incubadora de cultivo a 38,8°C, com atmosfera de 5% de CO2 e 95% de umidade relativa. A maturação foi analisada pela presença do primeiro corpúsculo polar. Em seguida, os CCOs maduros foram submetidos à FIV, com período de coincubação dos CCOs e dos espermatozoides de 15h, a 38,8ºC e 5% de CO2, e AP com ionomicina. Os grupos de MIV foram analisados utilizando-se o teste qui-quadrado e, nos experimentos de FIV e AP, foram analisadas a taxa de clivagem e a proporção de desenvolvimento embrionário. A análise estatística foi realizada utilizando-se o programa SAS. Houve diferença significativa entre os grupos de maturação, tendo os grupos MAT - 20 e MAT - 24 apresentado maior porcentagem de oócitos maturados in vitro. As taxas de clivagem e de desenvolvimento embrionário foram de 8,6% e 2,9%, respectivamente, na FIV, e de 63,6% e 15,1%, na AP. Entretanto, nos dois casos, o embrião não passou do estágio de mórula.(AU)
The objective was to evaluate IVM protocols for agouti oocytes, followed by in vitro fertilization (IVF) and parthenogenetic activation (PA). The immature oocytes (CCOs) were obtained by slicing the ovary after OSH and submitted to three groups: MAT - 16 (16 hours maturation), MAT - 20 (20 hours maturation) and MAT - (24 hours maturation), in a culture incubator at 38.8°C, with an atmosphere of 5% CO2 and 95% relative humidity. The maturation was analyzed by the presence of the first polar corpuscle. Then, mature CCOs were submitted to IVF, with co-incubation period of CCOs and spermatozoa from 15h to 38.8°C and 5% of CO2, and PA with inomycin. The IVM groups were analyzed using the chi-square test and in the FIV and PA experiment the rate of cleavage and the rate of embryonic development were analyzed. Statistical analysis was performed using the SAS program. There was a significant difference between the maturation groups, and the MAT - 20 and MAT - 24 groups showed a higher percentage of matured oocytes in vitro. The rates of cleavage and embryonic development were 8.6% and 2.9%, respectively in FIV and 63.6% and 15.1% in PA. However, in both cases the embryo did not pass beyond the morula stage.(AU)
Assuntos
Animais , Oócitos , Fertilização in vitro/veterinária , Técnicas de Maturação in Vitro de Oócitos/veterinária , Dasyproctidae , Partenogênese , IonomicinaRESUMO
The aim of this work was to evaluate the effect of the Rolipram during the maturation of bovine oocytes and gene expression of embryos produced in vitro. Bovine ovaries were collected in slaughterhouse. The COCs were selected and divided into 5 groups: Control 0 time; Control: IVM for 24 hours; Rolipram treatments with IVM blocking for 24 hours in maturation medium containing (100, 150 and 200µM). After 24 hours all groups were reseated in IVM for another 24 hours. Subsequently COCs were subjected to the same IVM system and fertilized, being checked for cleavage post fertilization and for blastocyst. In addition, performed expression of the following genes: Mater, BMP15 and Bax. No difference was found in gene expression. Of oocytes evaluated shortly after follicular aspiration, 79.00% were in GV, GVBD, MI, while 13.40%, were in MII and 7.60%, D/NI. Significant difference was observed in different concentrations (T100, T200 and T150µM) in oocytes that have reached the MII phase compared to control treatments (P= 0.003). Differences were observed in cleavage rate (P< 0.05) between T150 and T200 when compared to the C/24 Group. A high difference was observed on blastocyst rate (P< 0.001) among treatments compared to the control group.(AU)
O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito do rolipram durante a maturação de oócitos bovinos, expressão gênica e embriões produzidos in vitro. Os ovários bovinos foram coletados no matadouro. Os COCs foram selecionados e divididos em cinco grupos: controle 0 tempo; controle: MIV por 24 horas; tratamentos rolipram com bloqueio MIV por 24 horas em meio de maturação contendo 100, 150 e 200µM. Após 24 horas, todos os grupos foram recolocados em MIV por mais 24 horas. Subsequentemente COCs foram submetidos ao mesmo sistema MIV e fertilizados, sendo avaliada a taxa de clivagem e de blastocisto, além da expressão dos seguintes genes: Mater, BMP15 e Bax. Nenhuma diferença foi observada na expressão gênica. Dos oócitos avaliados logo após a aspiração folicular, 79,0% estavam em GV, GVBD, MI, enquanto 13,40% estavam em MII, e 7,60% em D/NI. A diferença significativa foi observada em diferentes concentrações (T100, T200 e T150µM) em oócitos que atingiram a fase MII em comparação aos tratamentos de controle (P=0,3). Diferenças foram observadas nas taxas de clivagem (P<0,5) entre T150 e T200 quando comparadas com as taxas do grupo C/24. Uma grande diferença foi observada na taxa de blastocisto (P<0,1) entre os tratamentos em relação ao grupo controle.(AU)
Assuntos
Animais , Feminino , Bovinos , Oócitos/crescimento & desenvolvimento , Expressão Gênica/efeitos dos fármacos , Rolipram/farmacologia , Desenvolvimento Embrionário/efeitos dos fármacos , Técnicas In Vitro/métodos , Técnicas In Vitro/veterináriaRESUMO
The urge for the control of reproductive processes in animals has propelled a great gain in knowledge, also setting off the development of four generations of assisted reproductive technologies (AR T) for humans and animals. The use of assisted reproductive techniques has been of great importance in livestock production. In general terms, the main first three generations of ARTs, including 1) artificial insemination (AI) and gamete and embryo freezing, 2) multiple ovulation and embryo transfer (MOET) and 3) in vitro fertilization(IV F) procedures, have matured into successful commercial applications, facilitating the increase in production through genetics, the reduction in generation intervals, the control ofdiseases, and the cutback in production costs. The fourth generation of AR T encompasses processes that are still more experimental, comprising cloning by nuclear transfer (NT) of embryonic or somatic cells, transgenesis, and stem cell biology. Such technologies are intertwined with one another and with currently available molecular tools, being completely dependent upon the previous generations of technologies. However, many reproductive challenges still hinder maximal livestock reproductive performance, affecting productivity and profitability. It is clear that the application of such technologies as lucrative activities will remain questionable if not associated with other components of animal production,such as animal health, nutrition and adequate animal husbandry practices.
El afán por controlar los procesos reproductivos en animales ha llevado a una gran ganancia en conocimiento, impulsando el desarrollo de cuatro tecnologías reproductivas asistidas(AR Ts) para animales y humanos. El uso de AR Ts ha sido de gran importancia en la producciónganadera. En términos generales, las tres principales generaciones de AR T, incluyendo 1) inseminación artificial (AI) y congelación de gametos y embriones, 2) superovulación y transferencia de embriones (MOET) y 3) procedimientos de fertilización in Vitro, han madurado en aplicaciones comerciales exitosas, facilitando el incremento en la producción a través de la genética, reducción del intervalo generacional, control de enfermedades, y reducción de costos de producción. La cuarta generación de AR Ts incluye procesos que aún son muy experimentales, como transferencia de núcleos (NT) de células somáticas, transanigénesis, y biología de células madre. Estas tecnologías se intercalan las unas con las otras y con las herramientas moleculares actuales, dependen completamente de las generaciones de tecnologías previas. Sin embargo, hay muchos retos reproductivos que no permiten alcanzarel potencial reproductivo máximo, afectando la productividad y la rentabilidad. Es claro que la aplicación de tales tecnologías como actividades lucrativas se mantendrán cuestionadassi no se asocian a otros componentes de la producción pecuaria, como la salud animal, nutrición, y prácticas de manejo adecuadas.
Assuntos
Animais , Bovinos/genética , Clonagem de Organismos , InseminaçãoRESUMO
The in vitro production of bovine embryos by in vitro fertilization or nuclear transfer procedures is a powerful tool in wide use for scientific, conservationist and commercialpurposes. However, developmental abnormalities are unpredictable consequences of such in vitro embryo manipulations, which may interfere with the pattern of fetal and placentalgrowth and life ex utero, in a set of symptoms collectively called Large Offspring Syndrome (LOS). The economical significance of the syndrome is associated with increased rates ofpregnancy losses, placental and fetal aberrations that culminate in abortion, hydrops of the fetal membranes, prolonged gestation, diminished signs of parturition, dystocia, and birth of large calves with lower postnatal survival. Lower pregnancy rates with higher gestational and postnatal losses represent significant economical losses for a lower prolificacy. The understanding of mechanisms of prenatal growth in normal development and in those related to the syndrome will be of significance for prevention or attenuation of abnormalities ofcommon occurrence in cattle, with potential direct scientific and economical implications.
La producción in vitro de embriones por fertilización in vitro o por procedimientos de transferenciade núcleos es una herramienta poderosa utilizada ampliamente para propósitoscientíficos, conservacionistas y comerciales. Sin embargo, las alteraciones del desarrollo son consecuencias impredecibles de tales manipulaciones in vitro, que pueden interferir con el patrón de de crecimiento fetal y placentario y la vida ex utero, que se agrupan en unos síntomas conocidos colectivamente como el síndrome del ternero grande (LOS). La importancia económica del síndrome está asociada con un incremento en las pérdidas gestacionales, aberraciones placentarias y fetales que culminan en aborto, condiciones hidópicas de las membranas fetales, gestaciones prolongadas, disminución en los signos de parto, distocias, y nacimiento de terneros grandes con baja supervivencia postnatal. Las bajastasas de preñez con las altas tasas de pérdidas gestacionales representan pérdidas económicas significativas por baja prolificidad. El entendimiento de los mecanismos de crecimientoprenatal durante el desarrollo normal y en aquellos relacionados con el síndrome sería muy significativo en la prevención, atenuación de las anormalidades de ocurrencia común en el ganado, con implicaciones directas a nivel científico y económico.